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是否有現(xiàn)貨：	是	認(rèn)證：	飛凈 phygene
級(jí)別：	超純、高純	用途：	實(shí)驗(yàn)室
含量：	標(biāo)準(zhǔn)品	應(yīng)用：	科學(xué)研究
型號(hào)：	pH0406	規(guī)格：	100ml
商標(biāo)：	飛凈 phygene	包裝：	瓶
產(chǎn)量：	2326

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Western及IP細(xì)胞裂解液(Cell lysis buffer for Western and IP)，是一種在非變性條件下裂解細(xì)胞的裂解液。本細(xì)胞裂解液裂解的細(xì)胞，可以用于PAGE，Western，免疫沉淀(immunol precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)。

Western及IP細(xì)胞裂解液的主要成分為20mM Tris(pH7.5)，150mM NaCl，1% Triton X-100，以及2mM sodium pyrophosphate，25mM β-glycerophosphate，1mM EDTA，1mM Na3VO4，0.5 ug/ml leupeptin等多種抑制劑?？梢杂行б种频鞍椎慕到猓⒕S持原有的蛋白間相互作用。用Western及IP細(xì)胞裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度。由于含有較高濃度的Triton X-100等干擾物質(zhì)，不能用Bradford法測(cè)定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
使用說明:
對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：

1. 融解Western及IP細(xì)胞裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。

2.?對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入微升裂解液的比例加入裂解液。用*吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1-2秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解。

3.?對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成萬細(xì)胞/管，然后再裂解。大團(tuán)的細(xì)胞較難裂解充分，而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸，相對(duì)比較容易裂解充分。

4. 充分裂解后，g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

裂解液用量說明：通常6孔板每孔細(xì)胞加入100微升裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到150微升或200微升。

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對(duì)于組織樣品：

1. 把組織剪切成細(xì)小的碎片。

2. 融解Western及IP細(xì)胞裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。

3. 按照每20毫克組織加入微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。)

4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

5. 充分裂解后，g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

6. 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
注意事項(xiàng):
1）為取得最佳的使用效果，盡量避免過多的反復(fù)凍融。可以適當(dāng)分裝后使用。裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。

2）關(guān)于裂解液的選擇，一方面可以參考我們生產(chǎn)的各種裂解液主要特點(diǎn)、差異，選擇合適的裂解液；另一方面也需要通過一些預(yù)實(shí)驗(yàn)來摸索最佳的適合您實(shí)驗(yàn)條件的裂解液。

3）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

*Important Note:?This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

我們所提供的產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床診斷、治療、食品或者化妝品等用途！