飛凈 Phygene ECL化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑 所屬目錄:生化試劑 搜索關(guān)鍵字:飛凈 Phygene ECL化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑 信息簡(jiǎn)介:飛凈 Phygene ECL化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑 |
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ECL化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑是基于Luminol的新一代化學(xué)發(fā)光底物試劑,它由辣根過(guò)氧化物酶(HRP)催化發(fā)生化學(xué)反應(yīng),發(fā)出熒光,結(jié)果可以通過(guò)X光片壓片和其他顯影技術(shù)展現(xiàn)或使用Luminometer檢測(cè)。溶液A主要成分為L(zhǎng)uminol及特制發(fā)光增強(qiáng)劑 。溶液B主要成分為H2O2及特殊穩(wěn)定劑。 適用范圍: >>ELISA>>Western & Far-Western Blot>>Dot Blot>>Southern Blot>>Northern Blot 操作步驟: 客戶自備溶液 >>漂洗緩沖液:PBS中含0.05-0.1%的Tween-20。 >>封閉液(BSA型) >>用封閉液或PBS稀釋一抗,每個(gè)抗體的最佳稀釋度根據(jù)實(shí)驗(yàn)來(lái)決定。 >>用封閉液或PBS稀釋HRP標(biāo)記的二抗,每個(gè)二抗的最佳稀釋度根據(jù)實(shí)驗(yàn)來(lái)決定。 >>暗室、暗盒、X光片等曝光設(shè)備。 1. 封閉:將膜與封閉液室溫振蕩孵育60分鐘,或4℃過(guò)夜。 2. 將膜與用封閉液稀釋的一抗室溫振蕩孵育1~2小時(shí)或4℃過(guò)夜。 3. 用漂洗緩沖液洗膜2~3次,每次5分鐘。 注意:增加漂洗次數(shù)、加大漂洗緩沖液量將有助于降低背景。 4. 將膜與用封閉液稀釋的HRP標(biāo)記的二抗室溫振蕩孵育1小時(shí)。 5. 用漂洗緩沖液洗膜2~3次,每次5分鐘以除去未結(jié)合的HRP標(biāo)記的二抗。 注意:膜和二抗孵育后必須充分洗滌,以除去膜上未結(jié)合的HRP標(biāo)記的二抗。 6. 將底物試劑A和試劑B等體積混合制備底物工作液,底物工作液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。 注意:底物試劑從4度拿出后應(yīng)平衡至室溫,經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明反應(yīng)溫度是10~50℃,最佳反應(yīng)溫度是20~37℃。每cm2膜約需0.125ml的底物工作液,為了取得最佳效果,建議使用新鮮配制的底物工作液。 7. 洗滌好的膜擺放到保鮮膜上,將底物工作液滴加到膜上,確保工作液均勻覆蓋在膜上,放置1-2分鐘。 8. 瀝去或吸去多余的工作液,覆蓋透明塑料膜保濕,隨后X光片檢測(cè)。 9. 暗室中小心地將X光片壓到膜上,先初始曝光30秒,觀察結(jié)果。改變曝光時(shí)間以取得最佳效果?;蜃鲆黄毓鈺r(shí)間梯度。 注意:發(fā)光反應(yīng)的前2-30分鐘光信號(hào)最強(qiáng),一般能持續(xù)數(shù)小時(shí),但隨著時(shí)間延長(zhǎng),光信號(hào)降低。若抗原含量低、信號(hào)弱,可以適當(dāng)延長(zhǎng)曝光時(shí)間。 *Important Note:?This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications. 我們所提供的產(chǎn)品僅供科研使用,不得用于臨床診斷、治療、食品或者化妝品等用途! |
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