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是否有現(xiàn)貨：	是	認(rèn)證：	PH0203
級(jí)別：	超純、高純	用途：	實(shí)驗(yàn)室
應(yīng)用：	科學(xué)研究	型號(hào)：	PH0203
規(guī)格：	50t | 100t	商標(biāo)：	飛凈 Phygene
包裝：	盒	產(chǎn)量：	2656

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

本試劑盒先用溶菌酶處理，再用堿裂解法裂解細(xì)胞，通過吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結(jié)合溶液中的DNA的特性提取質(zhì)粒DNA。吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料能高效、專一地吸附DNA，可最大限度去除雜質(zhì)蛋白質(zhì)及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。從1-5ml培養(yǎng)液中，可快速提取5-15μg純凈地高拷貝質(zhì)粒DNA，提取率達(dá)85-90％。使用本試劑盒提取的質(zhì)粒DNA可適用于各種常規(guī)的分子生物學(xué)試驗(yàn)，包括酶切、PCR、測(cè)序、連接和轉(zhuǎn)化等試驗(yàn)。本試劑盒無需使用酚、氯仿等有毒試劑，操作安全。

使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶體上的標(biāo)簽。溶液Ⅰ在使用前先加入 RNaseA（將試劑盒中提供的 RNaseA 全部加入） ，混勻，置于 2-8℃保存。如非指明，所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。

使用說明

1、取 1-5ml? 細(xì)菌培養(yǎng)物，12000rpm離心 1min，盡量吸除上清（菌液較多時(shí)可以通過多次離心將菌體沉淀收集到一個(gè)離心管中）。?

2、向留有菌體沉淀的離心管中加入 200ul? 溶液Ⅰ(請(qǐng)先檢查是否已加入 RNaseA）, 使用移液器或旋渦振蕩器徹底懸浮細(xì)菌細(xì)胞沉淀。再向其中加入 50ul? 溶菌酶，混勻。37℃水浴 30 min? 以上（根據(jù)菌液量可適當(dāng)加長(zhǎng)水浴時(shí)間）。注意：如果菌塊未徹底混勻，會(huì)影響裂解導(dǎo)致質(zhì)粒提取量和純度偏低。如不能確定為何種菌，請(qǐng)按陽性菌處理。?

3、向離心管中加入 250ul? 溶液Ⅱ，溫和地上下翻轉(zhuǎn) 6-8? 次使菌體充分裂解。注意：混勻一定要溫和，以免污染基因組 DNA，此時(shí)菌液應(yīng)變得清亮粘稠，作用時(shí)間不要超過 5 min，以免質(zhì)粒受到破壞。?

4、向離心管中加入 350ul? 溶液Ⅲ，立即溫和地上下翻轉(zhuǎn) 6-8 次，充分混勻，此時(shí)會(huì)出現(xiàn)白色絮狀沉淀。 11000rpm離心 10 min? 。注意：溶液Ⅲ加入后應(yīng)立即混勻，避免產(chǎn)生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀，可再次離心后取上清。?

5、將上一步所得上清液加入吸附柱中（吸附柱加入收集管中），室溫放置 2min，12000rpm? 離心 1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中(? 如果一次加不完，可分兩次吸附)? 。?

6、向吸附柱中加入 700ul? 漂洗液(? 使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇)? ，12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。?

7、向吸附柱中加入 500ul? 漂洗液，12000rpm離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。?

8、12000rpm 離心 2min，將吸附柱敞口置于室溫或 50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR? 等。?

9、將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加 50-200ul? 經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液，室溫放置2min，12000rpm離心 1min，收集質(zhì)粒DNA溶液。?

10、（可選）為了增加質(zhì)粒的回收率，可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中，室溫放置2min， 12000rpm離心 1min。 ?

注意事項(xiàng)

1、溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA(將試劑盒中提供的RNaseA全部加入)，混勻，置于2-8℃保存。

2、第一次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明在漂洗液中加入無水乙醇配制成工作液(向15ml的漂洗液中加入60ml的無水乙醇)。

3、使用前請(qǐng)先檢查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現(xiàn)混濁，如有混濁現(xiàn)象，可在37℃水浴中加熱幾分鐘，待溶液恢復(fù)澄清后再使用。

4、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和漂洗液使用后應(yīng)立即蓋緊蓋子，如非指明，所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)室溫下進(jìn)行離心。

5、如果是提取革蘭氏陽性菌質(zhì)粒，必須在裂解細(xì)胞前破細(xì)胞壁，方法如下：收集適量菌體，加入250ul溶液Ⅰ充分懸浮菌體，加入溶菌酶至終濃度為10-20mg/ml，37℃處理30min左右。 加入溶菌酶的濃度和處理時(shí)間可根據(jù)不同的菌株和具體試驗(yàn)條件進(jìn)行調(diào)整。

6、洗脫緩沖液的體積最好不少于50ul，體積過小會(huì)影響回收效 率；洗脫液的pH值對(duì)洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液 應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范圍)，pH值低于7.0會(huì)降低洗脫效率。

*Important Note:?This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

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