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是否有現(xiàn)貨：	是	認證：	pH0204
級別：	超純、高純	用途：	實驗室
含量：	標準品	應用：	科學研究
型號：	pH0204	規(guī)格：	10t
商標：	飛凈 phygene	包裝：	盒
產(chǎn)量：	1366

產(chǎn)品簡介

本試劑盒先用溶菌酶處理，再用堿裂解法裂解細胞， 通過吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結合溶液中的DNA的特性提取質粒DNA。吸附柱中采用的硅基質材料能高效、專一地吸附 DNA，可最大限度去除雜質蛋白質及細胞中其他有機化合物。從50-100ml培養(yǎng)液中，可快速提取200-300μg純凈地高拷貝質粒 DNA，提取率達85-90％。使用本試劑盒提取的質粒DNA可適用于各種常規(guī)的分子生物學試驗，包括酶切、PCR、測序、連接和 轉化等試驗。本試劑盒無需使用酚、氯仿等有毒試劑，操作安全。

使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標簽。溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA（將試劑盒中提供的 RNaseA 全部加入），混勻，置于 2-8℃保存。如非指明，所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

使用說明

1、取50-200ml 細菌培養(yǎng)物，11000rpm離心5min，盡量吸除上清（菌液較多時可以通過多次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中）。

2、向留有菌體沉淀的離心管中加入5ml 溶液Ⅰ和1ml 溶菌酶，混勻。37℃水浴30 min 以上（根據(jù)菌液量可適當加長水浴時間，請先檢查溶液Ⅰ是否已加入 RNaseA），使用移液器或旋渦振蕩器徹底懸浮細菌細胞沉淀。注意：如果菌塊未徹底混勻，會影響裂解導致質粒提取量和純度偏低。

3、向離心管中加入 5ml 溶液Ⅱ，溫和地上下翻轉 6-8 次使菌體充分裂解。注意：混勻一定要溫和以免污染基因組DNA，此時菌液應變得清亮粘稠，作用時間不要超過5 min，以免質粒受到破壞。

4、向離心管中加入 7ml 溶液Ⅲ，立即溫和地上下翻轉 6-8 次，充分混勻，此時會出現(xiàn)白色絮狀沉淀。11000rpm離心10 min ，用移液器小心地將上清轉移到另一個干凈的離心管中，盡量不要吸出沉淀。注意：溶液Ⅲ加入后應立即混勻，避免產(chǎn)生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀，可再次離心后取上清。

5、將上一步所得上清液加入吸附柱中（吸附柱加入收集管中），室溫放置2min，11000rpm 離心2min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中( 如果一次加不完，可分兩次吸附) 。

6、向吸附柱中加入8ml 漂洗液( 使用前請先檢查是否已加入無水乙醇) ，11000rpm離心2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

7、向吸附柱中加入6ml 漂洗液，11000rpm離心2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

8、11000rpm離心5min，將吸附柱敞口置于室溫或 50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)實驗如酶切、PCR 等。

9、將吸附柱放入一個干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加 1-2ml 經(jīng)65℃水浴預熱的洗脫液，室溫放置5min，11000rpm離心2min，收集質粒DNA溶液。

10、（可選）為了增加質粒的回收率，可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中，室溫放置5min，11000rpm離心2min。

注意事項

1、溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA(將試劑盒中提供的RNaseA 全部加入)，混勻，置于2-8℃保存。

2、第一次使用前應按照試劑瓶標簽的說明在漂洗液中加入無水乙醇配制成工作液(向15ml的漂洗液中加入60ml的無水乙醇)。

3、使用前請先檢查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現(xiàn)混濁，如有混濁現(xiàn)象，可在 37℃水浴中加熱幾分鐘，待溶液恢復澄清后再使用。

4、洗脫緩沖液體積不應少于500ul，體積過小影響回收效率；洗脫液的pH 值對洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液應保證其 pH值在8.0左右( 可用NaOH 將水的pH值調至此范圍) ，pH值低于7.0會降低洗脫效率。DNA產(chǎn)物應保存在-20 ℃，以防DNA降解。

5、如果所提質粒為低拷貝質?；虼笥?10kb的大質粒，應加大菌體使用量，使用400-800ml過夜培養(yǎng)物，同時按照比例增加溶液Ⅰ、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量，吸附和洗脫時可以適當?shù)难娱L時間，以增加提取效率。

6、DNA濃度及純度檢測：得到的質粒DNA純度與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關。得到的DNA可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。DNA應在OD260處有顯著吸收峰， OD260 值為1 相當于大約50 μg/ml 雙鏈DNA、40 μg/ml 單鏈DNA。OD260/OD280比值應為1.7-1.9 ，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會偏低，因為pH值和離子存在會影響光吸收值，但并不表示純度低。

*Important Note:?This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

我們所提供的產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床診斷、治療、食品或者化妝品等用途！