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是否有現(xiàn)貨：	是	認(rèn)證：	PH0202
級(jí)別：	超純、高純	用途：	實(shí)驗(yàn)室
應(yīng)用：	科學(xué)研究	型號(hào)：	PH0202
規(guī)格：	10t	商標(biāo)：	飛凈 Phygene
包裝：	盒	產(chǎn)量：	1052

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

本試劑盒采用飛凈Phygene堿裂解法裂解細(xì)胞，根據(jù)離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結(jié)合溶液中的DNA 的原理特異性提取質(zhì)粒DNA。? 離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料能高效、專一地吸附 DNA，可最大限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物，一般從 ml 大腸桿菌 LB 培養(yǎng)液中，可快速提取 μg 高純度高拷貝的質(zhì)粒DNA，提取率達(dá) 85-90%。? 使用本試劑盒提取的質(zhì)粒 DNA 可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、測(cè)序、連接和轉(zhuǎn)化等試驗(yàn)。

使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶體上的標(biāo)簽。溶液Ⅰ在使用前先加入 RNaseA（將試劑盒中提供的 RNaseA 全部加入） ，混勻，置于 2-8℃保存。如非指明，所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。?

操作步驟

1.? 收集 ml 過夜培養(yǎng)的菌液 11000rpm離心10分鐘，盡量吸除上清(菌液較多時(shí)可以通過多次離心將菌體沉淀收集到一個(gè)離心管中)。

2.? 向留有菌體沉淀的離心管中加入 5ml 溶液Ⅰ (請(qǐng)先檢查是否已加入 RNaseA)? ，使用移液器或渦旋振蕩器徹底懸浮細(xì)菌細(xì)胞沉淀。注意：如果菌塊未徹底混勻，會(huì)影響裂解導(dǎo)致質(zhì)粒提取量和純度偏低。

3.? 向離心管中加入 5ml 溶液Ⅱ? ，溫和地上下翻轉(zhuǎn) 6-8 次使菌體充分裂解。??注意：①翻轉(zhuǎn)一定要溫和，以免污染細(xì)菌基因組 DNA。②作用時(shí)間不要超過 5 分鐘，以免質(zhì)粒受到破壞。

4.? 向離心管中加入 7ml 溶液Ⅲ? ，立即溫和地上下翻轉(zhuǎn) 6-8 次，充分混勻，此時(shí)會(huì)出現(xiàn)白色絮狀沉淀(如菌液過多，可在此步放置 5 分鐘，以盡可能的降解 RNA)。11000rpm 離心 10 分鐘，用移液器小心地將上清轉(zhuǎn)移到另一個(gè)干凈的離心管中，注意盡量不要吸出沉淀。

注意：溶液Ⅲ加入后應(yīng)立即混勻，避免產(chǎn)生局部沉淀。? 如果上清中還有微小白色沉淀，可再次離心后取上清。?

5.? 將上一步所得上清液加入吸附柱中(吸附柱放入收集管中)，室溫放置 2-3 分鐘，11000rpm 離心 30-60 秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中(如為提高得率，可將收集管中的液體加入吸附柱再次吸附一次)。

6.? 向吸附柱中加入 8ml 漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇)，11000rpm 離心 2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

7.? 向吸附柱中加入 6ml 漂洗液，11000rpm離心 2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

8. 11000rpm離心 5min，將吸附柱敞口置于室溫或 50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會(huì)影晌后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR 等。

9.? 將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加1-2ml經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液，室溫放置5min，11000rpm離心 2min，收集質(zhì)粒溶液用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

10.? 為了增加質(zhì)粒的回收效率，可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中，室溫放置 5min， 11000rpm離心 2min。

注意事項(xiàng)

1、溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA(將試劑盒中提供的RNaseA 全部加入)，混勻，置于2-8℃保存。

2、第一次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明在漂洗液中加入無水乙 醇配制成工作液(向15ml的漂洗液中加入60ml的無水乙醇。

3、使用前請(qǐng)先檢查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現(xiàn)混濁，如有混濁現(xiàn)象 可在37℃水浴中加熱幾分鐘，待溶液恢復(fù)澄清后再使用。

4、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和漂洗液使用后應(yīng)立即蓋緊蓋子，如非指明，所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)室溫下進(jìn)行離心。
更多參考：http://phygene.com/index.php/scientific-research-reagent/molecular-biology/plasmid-extraction/ph0202-plasmid-maxi-preparation-kit.html

*Important Note:?This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

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