飛凈 Phygene Western及IP細(xì)胞裂解液
| 是否有現(xiàn)貨： | 是 | 認(rèn)證： | 飛凈 phygene |
| 級別： | 超純、高純 | 用途： | 實(shí)驗(yàn)室 |
| 含量： | 標(biāo)準(zhǔn)品 | 應(yīng)用： | 科學(xué)研究 |
| 型號： | pH0406 | 規(guī)格： | 100ml |
| 商標(biāo)： | 飛凈 phygene | 包裝： | 瓶 |
| 產(chǎn)量： | 2326 |
Western及IP細(xì)胞裂解液(Cell lysis buffer for Western and IP)，是一種在非變性條件下裂解細(xì)胞的裂解液。本細(xì)胞裂解液裂解的細(xì)胞，可以用于PAGE，Western，免疫沉淀(immunol precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)。
Western及IP細(xì)胞裂解液的主要成分為20mM Tris(pH7.5)，150mM NaCl，1% Triton X-100，以及2mM sodium pyrophosphate，25mM β-glycerophosphate，1mM EDTA，1mM Na3VO4，0.5 ug/ml leupeptin等多種抑制劑。可以有效抑制蛋白的降解，并維持原有的蛋白間相互作用。用Western及IP細(xì)胞裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的Triton X-100等干擾物質(zhì)，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
使用說明:
對于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
1. 融解Western及IP細(xì)胞裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。
2.?對于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入微升裂解液的比例加入裂解液。用*吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1-2秒后，細(xì)胞就會被裂解。
3.?對于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成萬細(xì)胞/管，然后再裂解。大團(tuán)的細(xì)胞較難裂解充分，而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸，相對比較容易裂解充分。
4. 充分裂解后，g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
裂解液用量說明：通常6孔板每孔細(xì)胞加入100微升裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到150微升或200微升。
?
對于組織樣品：
1. 把組織剪切成細(xì)小的碎片。
2. 融解Western及IP細(xì)胞裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。
3. 按照每20毫克組織加入微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。)
4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
注意事項(xiàng):
1）為取得最佳的使用效果，盡量避免過多的反復(fù)凍融?？梢赃m當(dāng)分裝后使用。裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。
2）關(guān)于裂解液的選擇，一方面可以參考我們生產(chǎn)的各種裂解液主要特點(diǎn)、差異，選擇合適的裂解液；另一方面也需要通過一些預(yù)實(shí)驗(yàn)來摸索最佳的適合您實(shí)驗(yàn)條件的裂解液。
3）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
*Important Note:?This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
我們所提供的產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床診斷、治療、食品或者化妝品等用途！