是否有現(xiàn)貨：	是	認證：	飛凈 phygene
級別：	超純、高純	用途：	實驗室
含量：	標準品	應用：	科學研究
型號：	pH0210	規(guī)格：	50t | 100t
商標：	飛凈 phygene	包裝：	盒
產量：	2326

產品簡介：
本試劑盒采用可以特異性結合DNA的離心吸附柱和獨特的緩沖液系統(tǒng)提取細菌（革蘭氏陽性菌和陰性菌）的基因組DNA。溶菌酶能有效去除細菌細胞壁；蛋白酶K能把核酸解離出來； RNaseA能去除痕量的RNA污染；離心吸附柱能夠高效、專一吸附DNA，最大限度去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物，提取的基因組DNA片段大，純度高，質量穩(wěn)定可靠。

使用本試劑盒回收的DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫構建、Southern雜交等實驗。
使用說明：
● 準備工作：

1. 準備55℃和70℃水??；無水乙醇；1.5ml滅菌離心管。

2. 按照標簽所示在去蛋白液GD和漂洗液GW中加入無水乙醇，混勻后蓋緊瓶蓋后室溫貯存?zhèn)溆谩?/p>

3. 每次使用前請檢查緩沖液GA，緩沖液GB和去蛋白液GD是否有沉淀生成，如果出現(xiàn)沉淀，37℃溫浴至沉淀溶解后再使用。

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● 操作步驟：

如非指出，所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

1. 取細菌培養(yǎng)液1–2 ml，10,000 g離心1分鐘，盡量吸凈上清；向細菌沉淀中加入180μl EB，旋渦混勻后加入18μl 溶菌酶，室溫放置10-15分鐘，期間間歇混勻幾次。

注：溶菌酶的用量和處理時間與處理的細菌種類密切相關，用戶可以根據細菌種類進行調節(jié)。如革蘭氏陽性菌應將處理時間延長到30-60分鐘。

2. 10,000g離心1分鐘，吸棄大部分上清，留下約10 μl液體，徹底混勻。

注：由于余留的液體較少，徹底混勻菌體不太容易，用手指彈動管壁附加*頭反復吹打既能完全混勻菌體?；靹蛞欢ㄒ獜氐?，否則容易導致步驟8中離心柱堵塞。

3. 向菌體沉淀中加入200 μl緩沖液GA，混勻。

4. 向管中加入20 μl 蛋白酶K，混勻，55℃處理15-30分鐘，期間間歇混勻2-3次至溶液清亮。

注：加入蛋白酶K后會產生絮狀物，消化徹底的標志是絮狀物完全消失，溶液變清亮。如消化不徹底，會導致步驟8中離心柱堵塞。

5. 加入10 μl RNaseA（10 mg/ml）溶液，混勻后室溫放置2分鐘。

6. 加入220 μl緩沖液GB，混勻，70℃放置10-30分鐘（對于革蘭氏陽性菌，時間應延長到60分鐘）。

注：加入緩沖液GB時可能會產生白色沉淀，一般70℃放置相應時間后溶液會變清亮。如溶液未變清亮，應延長70℃處理時間。如果絮狀物不能處理干凈，容易導致步驟8中離心柱的堵塞。

7. 加入220 μl無水乙醇，充分混勻。

注：加入乙醇后會產生絮狀沉淀，可用*頭反復抽打1-2次將沉淀弄碎后再上柱。如果絮狀物未做處理，容易導致步驟8中離心柱的堵塞。

8. 將上一步所得溶液和絮狀沉淀加入到吸附柱CG中（吸附柱放入收集管中），11,000g離心5分鐘，倒掉廢液，吸附柱CG放入收集管中。

注：如果出現(xiàn)吸附柱堵塞現(xiàn)象，可將離心時間延長到10分鐘。

9. 向吸附柱CG中加入500 μl去蛋白液GD（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），11,000 g離心2分鐘，倒掉廢液，吸附柱放入收集管中。

10. 向吸附柱CG中加入700 μl漂洗液GW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），11,000 g離心60秒，倒掉廢液，吸附柱放入收集管中。

11. 向吸附柱CG中加入500 μl 漂洗液GW，11,000 g離心60秒，倒掉廢液。

12. 吸附柱CG放回收集管中，11,000 g離心2分鐘。

注：此步驟非常重要，其目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶反應（酶切、PCR等）實驗。

13. 將吸附柱CG轉入一個干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加50–100 μl經70℃水浴預熱的洗脫緩沖液EB，室溫放置2分鐘，11,000 g離心2分鐘。

【注】

① 洗脫緩沖液體積最好不少于50 μl，體積過小影響回收效率。

② 洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5范圍內，pH值低于7.0會降低洗脫效率。

14. DNA產物-20℃保存。

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● DNA濃度及純度檢測：

基因組DNA片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關。提取的DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度?？膳渲?.8-1.0％瓊脂糖凝膠，使用λ/HindIII判斷基因組的大小，完整的基因組大小應在23kb以上。使用分光光度計檢測時， OD260/OD280比值應為1.7–1.9之間，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水洗脫，比值可能偏低，但并不表明DNA純度不高。

*Important Note:?This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

我們所提供的產品僅供科研使用，不得用于臨床診斷、治療、食品或者化妝品等用途！